猪场进行非瘟检测，有哪些注意事项？什么情况可以确诊？

猪场进行非瘟检测时，确诊的判断依据是什么?

核酸检测结果为阳性

核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找动物淋巴结、血液或脾脏等组织器官是否存在外来入侵的病毒的核酸，来确定是否被病毒感染（人的新冠病毒检测和猪的非瘟病毒检测原理是一致的)。因此一旦检测为核酸“阳性”，即可证明动物体内有病毒存在。所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA)，新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒，非瘟病毒是一种双链DNA病毒。

检测韭瘟病毒和新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR ( qPCR)。在PCR反应体系中，荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。

样本来源包括：样本采集时应注意穿戴个人 生物安全 防护装备，实施现场消毒和废弃物处理。

1）活猪:血液，扁桃体液等液体样品。

2）病死猪:脾、肺、肾、淋巴结、肌肉等组织样品。

3）周边环境:饲料、车辆、粪便、污水、栏舍等均周边环境样品。

病毒核酸提取

病毒核酸提取前，一般血液、扁桃体液等液体样品不需处理，直接用病毒核酸提取试剂盒提取样品gDNA，对于耐抑制性能较强的qPCR试剂，也可以直接取液体样品进行下游qPCR实验。但组织样品在进行病毒核酸提取前，需要进行研磨裂解处理。

qPCR检测

qPCR 检测步骤包括配制qPCR反应体系和加样上机检测。每次检测试验都需要设立阳性对照和阴性对照组。具体操作可参照所用qPCR试剂盒说明书。

结果分析(不同企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值)

1、质控标准

1）阴性对照的Ct值应≥38或无Ct值。

2）阳性对照的Ct值应≤35，并出现典型的扩增曲线。

3）若阴性和阳性对照不满足以上条件，此次实验视为无效。

2、样品结果判定

1）阴性:检测样品的Ct值≥38或无Ct值，表明样品为阴性。

2）阳性:检测样品的Ct值≤35，且出现典型的扩增曲线，表示样品为阳性

3）可疑:检测样品的35≤Ct值≤38，且出现典型的扩增曲线，应重检，重检仍出现上述结果的判为阳性，否则判为阴性。